利巴韋林化學(xué)名稱(chēng)為：1-b-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺。又稱(chēng)三氮唑核苷或病毒唑，是一種能抑制核酸合成的廣譜抗病毒yao。
傳統(tǒng)的HPLC法均采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱檢測(cè)利巴韋林，但是該柱填料存在一些缺點(diǎn)。一方面硅膠填料鍵合的C18鏈會(huì)脫落，在較高的pH條件下，硅膠基質(zhì)易降解；另一方面，由于利巴韋林分子結(jié)構(gòu)上含有機(jī)氮基團(tuán)，在硅膠基材的色譜柱中，會(huì)因色譜柱填料中殘存的硅羥基與有機(jī)氮結(jié)構(gòu)產(chǎn)生氫鍵吸附，導(dǎo)致樣品部分地粘附在色譜柱的填料上，從而造成峰形拖尾和柱壓升高。
月旭材料科技（上海）有限公司推出的專(zhuān)用于利巴韋林分析的色譜柱，系采用高品質(zhì)離子排阻色譜填料——磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填裝制成的氫型強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱，符合美國(guó)25版藥典收載的利巴韋林含量測(cè)定HPLC測(cè)定法，以及中國(guó)2005版和2010版藥典中對(duì)色譜柱的要求。具有耐酸、耐高溫的特點(diǎn)，并可通過(guò)提高柱溫提高分析效率。

使用步驟：
1．用兩通取代色譜柱將儀器連接，用過(guò)濾好的超純水沖洗儀器50ml；
2．再用分析流動(dòng)相沖洗儀器50ml，將流速降到0ml/min；
3．將Xtimate® Sugar-H色譜柱連接在 HPLC系統(tǒng)上；
4．設(shè)置流速在 0.2-0.3ml/min直到柱溫達(dá)到設(shè)定值；
5．在柱溫達(dá)到設(shè)定值時(shí)，流速增至分析流速，流速變化以0.1ml/min為增量,待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。zui大流速不應(yīng)使壓力超過(guò)1500psi。

流動(dòng)相要求：
常用5~10 (mmol/l)的硫酸作為流動(dòng)相。推薦的流動(dòng)相用去離子的無(wú)菌水配制，水應(yīng)去離子化 ,大于2兆歐的電阻率 ,水中應(yīng)不含多價(jià)離子 ,尤其是過(guò)渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過(guò)0.45um或更小孔徑的濾膜除去細(xì)菌和其它顆粒，溶劑過(guò)濾推薦使用溶劑過(guò)濾器。
雖然流動(dòng)相已經(jīng)在真空過(guò)濾時(shí)脫氣,但還是應(yīng)該通過(guò)以下程序來(lái)*脫氣. 如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天 ,請(qǐng)將流動(dòng)相置于錐形瓶中 ,放在攪拌器 /電爐上 ,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā),用前將流動(dòng)相燒至沸點(diǎn)幾分鐘,使用時(shí)保持溫度 70‐90℃.這個(gè)操作能夠保證氣體 (尤其是CO2)不再重新溶解在流動(dòng)相中,同時(shí)也會(huì)防止微生物的滋生。
要保持裝流動(dòng)相的容器干凈,有蓋,且新鮮 ,流動(dòng)相需每 24小時(shí)重新配制。

注意事項(xiàng):
通常推薦壓力不超過(guò) 1500psi；
zui大流速推薦不超過(guò) 0.6ml/min(70℃) ；
流動(dòng)相中有機(jī)相的zui大含量為5%(V/V),樣品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和異丙醇不會(huì)影響柱子的性能；
柱子的溫度不要超過(guò) 95℃.通常高溫會(huì)帶來(lái)高的分辨率,但在 90‐95℃之間幾乎沒(méi)有變化，70℃以下對(duì)于許多糖,就異構(gòu)體的分離來(lái)說(shuō)不能提供足夠的分辨率,對(duì)于乙醇的定量,柱溫應(yīng)在75℃；
柱溫的快速變化不會(huì)對(duì)柱子帶來(lái)什么反作用,如果柱子在 60℃以下,那么zui高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時(shí)的高的粘度因此高的流速會(huì)帶來(lái)很高的反壓；
定期反向沖洗色譜柱(在每 5L流動(dòng)相之后),這將會(huì)有效地延長(zhǎng)色譜柱的壽命；
流速的變化不能超過(guò)0.5ml/min,流速變化應(yīng)該緩慢進(jìn)行,建議改變流速時(shí)以0.1ml/min為增量,直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速.任何的流速變化均要在不超過(guò) 0.5ml/min下進(jìn)行；在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設(shè)定應(yīng)比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。

保存條件:(72小時(shí)以上不用)
關(guān)掉柱溫箱,待柱子冷卻至室溫，停泵。
當(dāng)柱子冷卻后,從系統(tǒng)中移出,換上塑料堵頭,防止保存溶劑揮干,通常的流動(dòng)相都可作為保存柱子的適宜溶劑.在冰箱中5℃保存(不要冷凍),以防止微生物的滋生；
柱子拆掉后要用兩通連接在系統(tǒng)上, 先用水沖洗整個(gè)液相色譜系統(tǒng),然后用甲醇,zui后儀器系統(tǒng)保存在甲醇中。

在關(guān)機(jī)后的重新啟動(dòng)
當(dāng)開(kāi)啟帶有一個(gè)柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時(shí),打開(kāi)柱溫箱,流速開(kāi)始不要超過(guò) 0.2ml/min.待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達(dá)到工作溫度后再按通常的工作條件操作。

整夜的停機(jī)(放置少于 72小時(shí))
柱子留在系統(tǒng)中流速降到 0.2ml/min.循環(huán)溶劑,將流出的管路插入流動(dòng)相瓶中,如果不想開(kāi)著柱溫箱,那就關(guān)掉柱溫箱讓其冷卻。

在整夜停機(jī)后的開(kāi)啟
打開(kāi)柱溫箱,流動(dòng)相的流速不要超過(guò) 0.1‐0.2ml/min,保持此流速至少二十分鐘直到達(dá)到柱子工作所需溫度,然后再按照通常分析條件來(lái)設(shè)置。

故障檢查
Sugar‐H是以樹(shù)脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,如果樣品進(jìn)行了很好的前處理,那么大部分產(chǎn)生的問(wèn)題都和樹(shù)脂填料有關(guān),由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加, 脆弱的樹(shù)脂填料可能被泵的波動(dòng)沖到柱子的后篩板處.反壓的增加是否會(huì)發(fā)生,要經(jīng)常檢查在線(xiàn)過(guò)濾器以及保護(hù)柱中是否截留了微粒.如果不是此問(wèn)題,那么很可能是樹(shù)脂部分地堵在了出口端的篩板處,檢查這種情況是否發(fā)生需要關(guān)掉泵,將柱子的流路方向反過(guò)來(lái),然后泵流速開(kāi)到 0.1ml/min,20分鐘達(dá)到工作溫度后再設(shè)至工作時(shí)的流速。

柱子的再生步驟:
Sugar‐H柱子的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化,越是天然物,(尤其是含有那些重金屬和過(guò)渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品)越需要經(jīng)常地對(duì)柱子進(jìn)行再生,因?yàn)樗鼈儠?huì)與柱子發(fā)生置換。

如果利巴韋林的峰有拖尾,那么柱子需要做以下處理:
配制 500ml的再生溶液(pH2.5的稀硫酸), 把柱子流路方向反過(guò)來(lái),在 90℃下以0.5ml/min的流速?zèng)_洗一整夜.再生之后回到正常方向使用。當(dāng)柱子反沖時(shí)很重要的一點(diǎn)是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗,用冷的溶劑將會(huì)延緩沖洗的過(guò)程。