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液相色譜分析流動相中酸的選擇

更新時間:2022-12-02 點擊次數(shù):3147

磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸(常見的還比如甲酸,三氟yi酸等),他們的主要區(qū)別和選擇在于:


各自的酸性不同

磷酸的酸性比醋酸強,就是說,磷酸可以把流動相的pH值調(diào)到更低。

紫外本底

有些酸有紫外本底,如甲酸,乙酸;有些沒有,如磷酸。這樣,在使用較低波長檢測的方法時,就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應該慎用。

揮發(fā)性

有些酸是揮發(fā)性酸,如甲酸,乙酸,三氟yi酸等;有些不揮發(fā),如磷酸。使用不揮發(fā)酸,流動相的pH相對穩(wěn)定,而揮發(fā)性酸可能隨時間造成流動相pH緩慢改變。但是,不揮發(fā)酸的不揮發(fā)性,限制了它們在液質(zhì)聯(lián)用時候的使用。

離子強度

酸的離子強度不同,離子強度在很多情況下影響被分析物的解離和性質(zhì),造成保留和峰型的改變,常離子強度為: 三氟yi酸>磷酸>甲酸>乙酸。離子強度很高的酸,通常會對液質(zhì)聯(lián)用產(chǎn)生強烈的抑制,如三氟yi酸,幾乎可以讓負模式掃描信號全部被抑制。

實例:甘草酸銨含量測定液相色譜分析,結(jié)構(gòu)式:

微信截圖_20221202160817.png

1

方案一

使用初始方法濃度36.5%醋酸進行柱子篩選:

1)條件為:甲醇:醋酸:水=78:0.3:22,柱溫30,流速1mL/min,

Ultimate® LP-C18 (4.6*250mm,5μm),效果圖:

微信截圖_20221202160843.png

分析:此條件下基本分離,但雜質(zhì)靠近主峰。

2)改變流動相比例為甲醇:醋酸:水=75:0.3:25,柱溫30,流速1mL/min,Ultimate® LP-C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:

微信截圖_20221202160857.png

分析:  主峰包含雜質(zhì)峰,分離度降低。

3)保持原流動相比例,改變柱溫為25度,效果圖:

微信截圖_20221202160948.png

分析:此條件下分離度>1.5,雜質(zhì)距離主峰較遠。

4)使用同款色譜柱重現(xiàn),效果圖:

微信截圖_20221202160954.png

分析:柱間分離情況及保留時間有差異。

2

方案二

1)使用濃度99.5%的冰醋酸,條件為:甲醇:冰醋酸:水=78:0.3:22,柱溫40,流速1mL/min,篩選zui 優(yōu)柱子月旭Topsil® C18(4.6*250mm, 5μm),效果圖:


微信截圖_20221202161002.png

分析:此條件下分離度仍不夠。

2)改變流動相比例為甲醇:冰醋酸:水=72:0.3:28,柱溫40,流速1mL/min,Topsil® C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:

微信截圖_20221202161324.png

3)改變柱溫為30,流動相比例為甲醇:冰醋酸:水=72:0.3:28,流速1mL/min,Topsil® C18(4.6*250mm,5μm),效果圖:

微信截圖_20221202161358.png

微信截圖_20221202161407.png

分析:分離度>1.5,達到要求。

4)多針重現(xiàn),效果圖:

微信截圖_20221202161452.png

分析:保留時間較小差異,分離度良好。

結(jié)論:使用36.5%醋酸的流動相體系時,在合格的色譜柱條件下,選擇4支重現(xiàn),保留時間差異大??蓮囊韵陆嵌确治觯?/p>

1)該物質(zhì)本身就是一個兩性離子,有弱酸和弱堿離子,在此條件下,流動相本身的緩沖作用很有限。

2)流動相的pH在4-5之間,這時候在反相C18中硅羥基的解離狀態(tài)是zui活躍的時候(硅羥基的pKa在4.2至4.5之間),物質(zhì)對填料狀態(tài)以及柱子之間的差異很敏感,體現(xiàn)在用不同支的色譜柱差異大。在檢測甘草及其制品中的該物質(zhì)時,均出現(xiàn)過這樣的現(xiàn)象。

3)醋酸屬揮發(fā)性酸,在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸時,等量的變化在兩種流動相體系中的影響程度不同,引起色譜結(jié)果差異性不同。


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