流動相中含有緩沖鹽時，大的原則是：使用前要過渡，使用后要清洗（清洗包括兩個步驟，一個步驟是用來清洗緩沖鹽，另一個步驟是用來清洗強(qiáng)保留物質(zhì)的），具體請按如下方式保養(yǎng)色譜柱。

用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇體系則用甲醇：水＝10：90）以1mL/min流速過渡30min，約7個柱體積（目的是防止緩沖鹽在進(jìn)入柱子時析出）。

步驟1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1mL/min流速反向沖洗 45min，約10個柱體積（目的是洗去緩沖鹽，防止緩沖鹽在色譜柱內(nèi)存留引起使用壽命下降）；

步驟2）再用乙腈：水＝80：10（或甲醇：水＝80：10）1mL/min流速反向沖洗45min，約10個柱體積（目的是洗去分析過程中積累的強(qiáng)保留物質(zhì)，防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱內(nèi)進(jìn)一步積累，影響以后的分析，也防止強(qiáng)保留物質(zhì)的積累導(dǎo)致的柱壓升高），然后色譜柱保存在乙腈：水＝80：10（或甲醇：水＝80：10）中。

推薦先用正己烷-異丙醇（99：1）以 0.5mL/min的流速沖10倍柱體積，再根據(jù)流動相選用極性相近的流動相，相同流速沖10倍柱體積，最后換成流動相。正相使用時，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析；流動相要*脫氣，并不得含有羰基化合物和過氧化物（質(zhì)量不好的乙mi、四氫呋喃含有少量）。

先用異丙醇以0.5mL/min的流速沖30倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用乙腈沖柱子，在過渡到流動相體系。再換成流動相。反相條件下使用時，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險，流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險。最li想的pH范圍在pH2.5~8范圍，建議水相<40%以下使用。

正相條件下，可以直接采用流動相平衡系統(tǒng)，使用后用異丙醇以0.5mL/min流速反向沖洗60min，最后保存在異丙醇中，正向使用。

反相條件下使用，先用異丙醇以0.5mL/min流速過渡60min，再用甲醇或乙腈沖洗色譜柱30min以過渡到反相模式。然后再更換成流動相進(jìn)行平衡如果流動相中有緩沖鹽，使用前用采用流動相同等比例的有機(jī)相和水相進(jìn)行過渡，但水相中不含緩沖鹽。過渡30min后再換成流動相進(jìn)行平衡色譜柱。

1）新柱活化：用異丙醇0.5mL/min流速沖洗4個小時，再純乙腈、70%乙腈水各1mL/min流速各1小時，然后用流動相沖洗至基線平穩(wěn)進(jìn)樣。

2）流動相配置：建議兩項流動相預(yù)混合，并且流動相混合前分別采用水膜和有機(jī)相膜過濾水相和有機(jī)相，然后按照比例配制混合500mL的流動相于同一溶劑瓶中，流動相于同一溶劑瓶中（手動預(yù)混合好），充分搖晃溶劑瓶，使兩項混合均勻，采用超聲脫氣20分鐘，如果有變熱的跡象，放置回到室溫。

將流動相放于儀器上，打開儀器泵，檢測器，在線脫氣機(jī)等電源，設(shè)置：柱溫：45℃，檢測器溫度：40℃，流速：1mL/min，打開RID檢測器參比池，沖洗30min以后，將示差檢測器的循環(huán)按鈕打開，使得流出液從的RECYCLE管路流出（回流管液體流出去20min后），再將回流管放置于流動相瓶子中，進(jìn)行流動相循環(huán)。

3）循環(huán)一晚上以后，第二天將流動相循環(huán)切換至waste流路，關(guān)閉參比池，沖洗樣品池30min以后，基線平穩(wěn)，進(jìn)樣檢測。

4）如果1mg/mL濃度乳糖還是沒有出峰，配置一個濃度為5mg/mL濃度。

注意：晚上循環(huán)時一定是分析樣品的流動相色譜條件設(shè)置。 

Xtimate^® Sugar-Ca，Sugar-H，填料屬于聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物基質(zhì)，磺化強(qiáng)陽離子交換樹脂，在使用過程中首先要避免的情況是流動相試劑污染色譜柱，特別避免使用純有機(jī)溶劑沖洗造成色譜柱填料出現(xiàn)溶脹，改變填料性質(zhì)造成色譜柱分離效果失去。

Sugar-Ca針對藥典測定甘露醇和山梨醇，也可以用測定碳水化合物，各種單糖或聚合糖測定，流動相系統(tǒng)和樣品溶劑基本采用純水體系。

Sugar-H針對藥典中利巴韋林測定，也可以用于測定碳水化合物或有機(jī)酸類物質(zhì)分離，所用流動相是硫酸水溶液pH為2.5左右。使用完后基本上采用流動相低溫4度封存，在封存過程中時間過久也會有所長菌，故封存一段時間（2~3）周最好換新流動相封存，若長期不使用可以在流動相中加入5%乙醇做改善試劑，避免長菌現(xiàn)象。 

當(dāng)主峰峰形有所變化，柱效有所降低時，需要進(jìn)行再生；

Sugar-Ca保護(hù)柱的再生方法與Sugar-Ca分析柱方法一致，根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是天然物（尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品），越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生，因為它們會與柱子發(fā)生置換。可以通過注射蔗糖來測試柱子的置換情況。如果蔗糖的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理: 配制500mL的再生溶液（Ca EDTA 500mg/L Cas:23411-34-9），把柱子流路方向反過來，在85℃以 0.5mL/min的流速沖洗一整夜。再生之后回到正常方向使用。

Sugar-H柱子的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是天然物，（尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品），越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生，因為它們會與柱子發(fā)生置換。如果主峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理: 配制 500mL的再生溶液（pH2.5的稀硫酸），把保護(hù)柱和分析柱作為整體將流路方向反過來，在85℃以 0.5mL/min的流速沖洗一整夜。再生之后回到正常方向使用，當(dāng)柱子反沖時很重要的一點是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗，用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程。