液相色譜柱的分類(按色譜固定相基質(zhì)分)
 

　　1.硅膠基質(zhì)：
 

　　1.1反相色譜柱：
 

　　反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
 

　　1.2正相色譜：
 

　　正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)，以及其他具有極性官能團，如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正乙烷(Hexane),,二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
 

　　1.3離子交換色譜柱：
 

　　以磺化交聯(lián)強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，常用規(guī)格：強陰離子色譜柱(SAX)，強陽離子交換色譜柱(SCX)
 

　　2.聚合物基質(zhì)：
 

　　聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。
 

　　所有聚合物基質(zhì)在流動相發(fā)生變化時都會出現(xiàn)膨脹或收縮。用于HPLC的高交聯(lián)度聚合物填料，其膨脹和收縮要有限制。溶劑或小分子容易滲入聚合物基質(zhì)中，因為小分子在聚合物基質(zhì)中的傳質(zhì)比在陶瓷性基質(zhì)中慢，所以造成小分子在這種基質(zhì)中柱效低。對于大分子像蛋白質(zhì)或合成的高聚物，聚合物基質(zhì)的效能比得上陶瓷性基質(zhì)。因此，聚合物基質(zhì)廣泛用于分離大分子物質(zhì)。
 

　　色譜柱的選擇
 

　　液相色譜儀基質(zhì)的選擇大致遵循以下法則，硅膠基質(zhì)的填料被用于大部分的HPLC分析，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物質(zhì)，主要用來制成分子排阻和離子交換柱。
 

　　色譜柱在使用前，建議進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳的條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
 

　　色譜柱的維護
 

　　1. 色譜柱的平衡
 

　　反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得大的“補償“。
 

　　2. 色譜柱的再生
 

　　長期使用的色譜柱，往往柱效會下降(柱子的理論塔板數(shù)減低)。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。建議用來沖洗柱子的溶劑體積。